Fluoreszenzlebenszeitmessungen in einem Lichtschicht-Fluoreszenz-Mikroskop

Die Lichtschicht-Fluoreszenz-Mikroskopie (LSFM) ist eine leistungsstarke Methode zur 3D-Charakterisierung fluoreszierender Proben. Neben der schichtweisen Messung der Fluoreszenzintensität kann mit Hilfe der Methode TCSPC (time correlated single photon counting) gleichzeitig auch die Fluoreszenzlebenszeit gemessen werden. Dies gibt Aufschluss über Prozesse in biologischen Proben. Bei dem Verfahren werden die Ankunftszeit und der Auftreffort einzelner Fluoreszenz-Photonen auf einem Detektor ermittelt, wodurch es bei der Messung sehr vieler Photonen bedarf, um eine gute statistische Auswertung zu gewährleisten. Wir zeigen erste Ergebnisse für Lebenszeit-Messungen bei Beleuchtung von Proben mit einer Lichtschicht. Wir untersuchen die Qualität der Lichtschicht bei Verwendung eines gepulsten Diodenlasers bei 375 nm Wellenlänge und vergleichen verschiedene Möglichkeiten der Strahlformung. Hierbei ermittelten wir verschiedene Parameter wie Messdauer, Laserleistung und Binning der Detektorfläche, um die optimalen Messbereiche für verschiedene Konfigurationen zu ermitteln.